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4.條件：同種限制酶、DNA連接酶、(目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因)

三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。

①導(dǎo)入植物細(xì)胞：常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(將構(gòu)建的載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌，再讓農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞)，基因槍法、花粉管通道法。

②導(dǎo)入動物細(xì)胞：顯微注射法(將基因表達(dá)載體提純，用顯微儀注射到受精卵中)

③導(dǎo)入微生物細(xì)胞：Ca²⁺處理受體細(xì)胞成為感受態(tài)細(xì)胞，再進(jìn)行混合。

提示：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的原理是利用農(nóng)桿菌(胞內(nèi)寄生菌)對植物的感染而把目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。

四.目的基因的檢測和鑒定

分子檢測：導(dǎo)入檢測+表達(dá)檢測

①導(dǎo)入檢測：利用DNA分子雜交技術(shù)，目的基因DNA一條鏈(作探針)與受體細(xì)胞中提取的DNA雜交，看是否有雜交帶。

②表達(dá)檢測：目的為了檢測是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，利用DNA-mRNA分子雜交技術(shù)，目的基因DNA一條鏈(作探針)與受體細(xì)胞中提取的mRNA雜交，看是否有雜交帶。

③表達(dá)檢測：目的為了檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。抗體與蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原-抗體雜交，看是否有雜交帶。

個體水平的鑒定：進(jìn)行抗蟲、抗病的接種實驗，根據(jù)其性狀判斷是否表達(dá)。

提示：①DNA分子雜交技術(shù)首先提取受體細(xì)胞中的DNA，然后高溫解成單鏈，再與同位素標(biāo)記的DNA探針雜交;②抗原-抗體雜交所用到的抗體是用表達(dá)出的蛋白質(zhì)注射動物進(jìn)行免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并提取出而來的

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