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【DNA重組技術(shù)的基本工具】

知識點一 基因工程的概念

基因工程是指按照人們的愿望，進行嚴格的設(shè)計，并通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是在DNA分子水平上進行設(shè)計和施工的，因此又叫做DNA重組技術(shù)。

注意：對本概念應(yīng)從以下幾個方面理解：

知識點二 基因工程的基本工具

1.限制性核酸內(nèi)切酶——“分子手術(shù)刀”

(1)限制性內(nèi)切酶的來源：主要是從原核生物中分離純化來的。

(2)限制性內(nèi)切酶的作用：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并能將每一條鏈上特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵切開。

(3)限制性內(nèi)切酶的切割方式及結(jié)果：①在中心軸線兩側(cè)將DNA切開，切口是黏性末端。②沿著中心軸線切開DNA，切口是平末端。

2.DNA連接酶——“分子縫合針”

(1)來源：大腸桿菌、T₄噬菌體

(2)DNA連接酶的種類：E.coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶。

(3)作用及作用部位：E.coliDNA連接酶作用于黏性末端被切開的磷酸二酯鍵，T₄DNA連接酶作用于黏性末端和平末端被切開的磷酸二酯鍵。

注意：比較有關(guān)的DNA酶

(1)DNA水解酶：能夠?qū)NA水解成四種脫氧核苷酸，徹底水解成磷酸、脫氧核糖和含氮堿基

(2)DNA解旋酶：能夠?qū)NA或DNA的某一段解成兩條長鏈，作用的部位是堿基和堿基之間的氫鍵。注意：使DNA解成兩條長鏈的方法除用解旋酶以外，在適當?shù)母邷?如94℃)、重金屬鹽的作用下，也可使DNA解旋。

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