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一、知識(shí)點(diǎn)總結(jié)
微生物生長(zhǎng)的測(cè)定方法有多種，根據(jù)研究對(duì)象或目的選擇。
1.總細(xì)胞計(jì)數(shù)法
(1)血球計(jì)數(shù)板法：血球計(jì)數(shù)板中央有一個(gè)體積一定的計(jì)數(shù)室(0.1mm3)。將菌懸液或孢子懸液在顯微鏡下計(jì)數(shù)，然后再按一定公式計(jì)算出細(xì)菌總數(shù)。(顯微鏡直接計(jì)數(shù)法)
(2)涂片計(jì)數(shù)法：將一定體積(0.1ml)的樣品，均勻地涂在載片的一定面積內(nèi)(1cm2)。在顯微鏡下計(jì)算細(xì)胞數(shù)量，推算1cm2所含細(xì)胞數(shù)目。
(3)比濁法：菌體細(xì)胞培養(yǎng)液混濁，在一定范圍內(nèi)，菌體數(shù)量與渾濁成正比，故可通過分光光度計(jì)或比色計(jì)求出渾濁度，通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，求出樣品中菌液濃度，算出個(gè)體數(shù)。特點(diǎn)：所得結(jié)果包括死菌和活菌。
2.間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)
(1)涂布平板法：用滅菌的涂布器將一定體積(不大于0.1ml)的適當(dāng)稀釋度的菌液涂布在瓊脂培養(yǎng)基的表面，然后保溫培養(yǎng)直到菌落出現(xiàn)，記錄菌落的數(shù)目并換算成每毫升試樣中的活細(xì)胞數(shù)量。
(2)倒平板法：將樣品稀釋到一定濃度，取一定體積(0.1-1ml)倒入冷卻至45℃的固體培養(yǎng)基混合，制成平板，培養(yǎng)后，出現(xiàn)菌落，由菌落數(shù)推算出的菌總數(shù)。
(3)濾膜過濾法：樣品通過微孔濾膜后，細(xì)菌收集在濾膜上，然后將濾膜放在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，通過菌落計(jì)數(shù)求出樣品活菌落。
二、記憶小貼士
1.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。(缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌與活菌)
2.間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)：當(dāng)樣品的稀釋度數(shù)足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。(注意：樣品稀釋度。一個(gè)活細(xì)胞形成一個(gè)菌落。)
三、經(jīng)典例題
對(duì)微生物細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，不屬于總細(xì)胞計(jì)數(shù)法的方法是( )。
A.比濁法 B.涂片計(jì)數(shù)法 C.涂布平板法 D.血球計(jì)數(shù)板法
【答案】C。解析：對(duì)微生物細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，總細(xì)胞計(jì)數(shù)法的方法有比濁法、涂片計(jì)數(shù)法和血球計(jì)數(shù)板法，而涂布平板法屬于活菌計(jì)數(shù)法。因此，答案選C。
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